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人主动脉内皮细胞

作者:江阴齐氏生物科技有限公司 2014-09-05T16:32 (访问量:4142)

细胞描述
血管内皮细胞作为血管内膜的主要结构,在创伤修复、血管生成、止血、血栓形成、出血性疾病、动脉粥样硬化等一系列生理和病理过程中发挥重要作用。内皮细胞或血管内皮是一薄层的专门上皮细胞,由一层扁平细胞所组成,呈多边形,细胞的边缘呈锯齿状,相互嵌合。它形成血管的内壁,是血管管腔内血液及其他血管壁(单层鳞状上皮)的接口。内皮细胞是沿着整个循环系统,由心脏直至最小的微血管。血管内皮细胞(EC)位于血液与血管组织之间,它不仅能完成血液和组织液的代谢交换,并且能合成和分泌多种生物活性物质,以保证血管正常的收缩和舒张,起到维持血管张力,调节血压以及凝血与抗凝平衡等特殊功能,进而保持血液的正常流动和血管的长期通畅。抗凝血材料表面内皮细胞化,可以减少血栓的形成和血小板激活。
试剂和材料
人主动脉组织 、Collagenase-2、血清、M199基础培养基
实验步骤
1、将人主动脉组织用无菌PBS清洗4-5次;
2、去除主动脉组织表面的脂肪和结缔组织,L-DMEM培养基清洗2次,15ml离心管中加入10ml胶原酶消化液,37℃消化30min,消化期间每10min轻轻充分吹打细胞消化液;
3、用细胞刮分离血管内皮细胞,然后用200目细胞筛滤去大块组织,之后1500rpm离心5min;
4、弃上清,沉淀细胞加6ml完全培养液重悬,放入37℃,5% CO2细胞培养箱中培养;
5、培养24h后换液,以后每隔2-3天换1次液。在倒置显微镜下观察细胞形态与生长情况。
细胞传代及冻存
1、细胞生长至对数期,细胞达到80-90%融合。
2、移除细胞培养基,PBS清洗细胞2次。
3、加入0.25%胰酶,37℃消化,镜下观察细胞回缩变圆,完全培养基终止消化。
4、离心,重悬细胞后重新接种于新鲜培养基中。
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