马上要做慢病毒相关实验了，你是否会有这样那样的焦虑，不知从何下手啊！
实验室没有做过慢病毒实验，没有师兄师姐带，我需要了解些什么基础知识？
我该怎么准备实验，哪个公司的慢病毒产品靠谱啊？
找到靠谱的供应商，怎么找感染条件啊？
找到感染条件选哪个时期的细胞啊？
怎么看荧光啊？
感染效率低，达不到预期结果？
实验中出现各种无厘头的问题，解决起来耗费精力且令人头大，谁可以帮帮我吗？
…………
慢病毒实验中常见的小问题
关于慢病毒，你首先要了解哪些东西？
Q1 慢病毒活性滴度怎么标定最准？
绝对定量！绝对定量！绝对定量！“绝对定量”是医疗级病毒产品的公认滴度检测方法，诺华、Juno，这些CarT大佬们都在用！
2. TU=transducing units，即每毫升中含有的具有生物活性的病毒颗粒数。其他的VG/mL，VP/mL指所有病毒颗粒数，有无生物活性均计算在内。
Q3 如何确认最佳感染条件？
使用不同助感试剂和不同的细胞数与病毒颗粒数比例进行感染预试验，感染后选择感染效率在80%左右，感染后细胞状态正常且病毒使用量最小的感染条件作为最佳感染条件。
Q4 病毒感染时怎么选取的细胞？
在做病毒感染时除了使用合适的感染条件，更重要的是要使用处于对数生长期且细胞状态正常的细胞，这样才能保证细胞在病毒感染后仍能顽强生存。
Q5 对于细胞需要进行那些检测？
细胞最好有STR分型鉴定并经过支原体污染检测，如果在培养过程中以及发现支原体污染，可以使用支原体去除试剂盒消除细胞中的支原体。
Q6 不同的荧光基团要使用不同的发射波长，三种常见荧光的信息如下：
GFP 激发波长488 发射波长507
RFP激发波长563 发射波长582
mCherry激发波长587 发射波长610
Q7 病毒感染后qPCR检测无过表达效果原因
第一：很可能是细胞目的基因内源表达水平太高，影响了外源的表达，建议选择低表达细胞系；
第二：引物设计问题，过表达构建的都是CDS区，所以引物必须设计在CDS区才能检测出外源的过表达
Q8 细胞感染效率是越高越好吗？
细胞在感染完后感染效率达到80%即可进入下游实验，不一定非到100%的感染效率才可进入下游哦
Q9 加入慢病毒后，细胞死亡很厉害，该如何处理？
细胞死亡很严重可能是由于慢病毒对该细胞有一定的毒性作用，需要调整并降低感染的 MOI 值，并且在感染后 4 小时、8 小时、12 小时对细胞进行观察，若发现细胞状态变差，则需要立刻对细胞进行换液操作，使用新鲜的完全培养液替换病毒感染培养液。
细胞培养过程中的常见问题：
1. 细胞用慢病毒一感就死或者出现小黑点：细胞老化或者病毒过感染了
2. 培养基快速变黄且浑浊：存在细菌污染
3. 细胞生长缓慢：病毒过感染或者支原体污染或者细胞老化
4. 高浓度病毒感染组出现细胞死亡，低浓度组正常：病毒浓度太高对细胞有伤害
5. 任何感染组细胞均死亡：目的基因功能蛋白对细胞生长有杀伤作用
6. 显微镜下就可看到纵横交错穿行的丝状物：真菌污染
细胞实验的污染问题是不是搞得人怕怕的？
别担心，为了保证慢病毒的质量，吉凯的慢病毒开发出了的各级病毒纯化工艺，以满足科研、临床前研究或临床试验的不同需求。
吉凯慢病毒的质检包括支原体、内毒素、病毒毒性、真菌、细菌、活性滴度等多项指标，全方位保障病毒的高品质，免去您的后顾之忧。
吉凯结果和FDA要求汇总如下表
检测项目 | 吉凯检测结果 | 单位 | FDA参考范围 |
支原体 | 阴性 | - - | 阴性 |
肉毒素 | < 50 | EU/ml | < 50 |
病毒毒性 | 无毒性 | - - | 无毒性 |
细菌 | 阴性 | - - | 阴性 |
真菌 | 阴性 | - - | 阴性 |
总DNA残留 | 0.748-9.90 | ng/ul | 0.1-10.0 |
BSA残留 | 7.99-29.82 | ug/ml | 0.1-30.0 |
活性滴度 | 1.0E+8-2.0E+9 | TU/ml | ≥ 1E+8 |
慢病毒的动物实验不知道怎么注射动物，注射多少量？看看使用 吉凯慢病毒发表文章的小伙伴们是怎么做的吧。正式实验前，可参考文献中慢病毒注射的方式和剂量，设置梯度，确定注射参数。
不同于体外细胞实验，病毒注射活体动物，必须具有高纯度、高滴度及低毒性。尤其是脑部注射，仅允许1-5 μL的注射体积，为了达到理想的感染效果，注射的病毒滴度要求往往更高。此外，高纯度病毒，因其含有极少的杂质，注射动物时不易引起炎症反应。所以，各位小伙伴，病毒厂家多，选择需谨慎哦！
吉凯的慢病毒产品，已助力客户发表多项科研成果于Nature Medicine、Nature Immunology、Gastroenterology、Cell Metabolism、Nature Neuroscience等期刊上。
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【1】瑞金医院高血压研究所：A2A Receptor Activation Attenuates Hypertensive Cardiac Remodeling via Promoting Brown Adipose Tissue-Derived FGF21，Cell Metabolism（IF20.565）吉凯产品：干扰慢病毒
【2】北京安贞医院：Cardiac Fibroblast-Specific Activating Transcription Factor 3 Protects Against Heart Failure by Suppressing MAP2K3-p38 Signaling，Circulation（IF 18.881）吉凯产品：干扰慢病毒、过表达腺病毒等
【3】山东大学附属省立医院：Blocking FSH inhibits hepatic cholesterol biosynthesis and reduces serum cholesterol，Cell Research（IF 15.393）吉凯产品：干扰慢病毒、过表达腺病毒等
【4】重庆医科大学第二附属医院：CD36 palmitoylation disrupts free fatty acid metabolism and promotes tissue inflammation in non-alcoholic steatohepatitis，Journal of hepatology（IF 15.04）吉凯产品：慢病毒
【5】浙江大学医学院附属第二医院：EphrinB2 Regulates Cardiac Fibrosis Through Modulating the Interaction of Stat3 and TGF-β/Smad3 Signaling，Circulation Research（IF 15.211）吉凯产品：干扰慢病毒
【6】中国科学院神经科学研究所：PDGFRβ cells rapidly relay inflammatory signal from the circulatory system to neurons via chemokine CCL2，Neuron（IF 14.319）吉凯产品：干扰慢病毒
【7】中山大学附属第一医院：Long noncoding RNA LERFS negatively regulates rheumatoid synovial aggression and proliferation ，The Journal of Clinical Investigation（IF 13.251）吉凯产品：过表达慢病毒
【8】首都医科大学：Mandible exosomal ssc-mir-133b regulates tooth development in miniature swine via endogenous apoptosis，Bone research（IF 12.354）吉凯产品：上调和下调慢病毒。