原来作者早期的研究发现epigenetic regulators在神经母细胞瘤中异常表达；作者假设epigenetic regulators在交感神经祖细胞中的异常表达参与神经母细胞瘤的起始和发展。本课题中作者设计针对400个调控染色体结构和功能基因的high-throughput smallinterfering RNA (siRNA)(a pool offour siRNAs per gene)，利用HCS技术在NB2个细胞株：SY5Y、BE2C中筛选影响细胞增殖和形态分化的关键基因。HCS初筛得到53个基因在敲低表达的情况下降低细胞增殖能力；在53个基因中，16个基因同时又诱导了细胞的分化。初筛结束后，再在16个基因中单独针对每个基因利用siRNAs筛选出SETD8, CTCF, CENPE, INCENP和ACTR5既能降低细胞增殖(NN)和增强细胞分化(NL)。那么作者如何确定最关键的epigenetic regulators基因？(图2)

                          图2

接着作者采用21个epigenetic chemical probes(可以靶向90%的蛋白酶活性，这些蛋白的干扰siRNAs片段被siNRA库囊括).通过IC50和体外治疗指数的p值筛选标准，确定SETD8调控了神经母细胞瘤细胞的增殖和分化。（图3）


                         图3

作者通过HCS及epigenetic chemical probes实验找到了靶基因，那就定了针对这个基因往下开展工作了。接下来就是传统套路咯。


                                    图4

临床相关性验证：组织表达验证、母细胞瘤细胞系验证、预后分析(图4)


                               图5a

                              图5b

                                   图5c

机制研究：干扰SETD8做基因表达谱分析富集的信号通路(图5a)以及SETD8对p53信号通路调控的验证(图5b)；同样验证SETD8的化合物UNC0379对P53信号通路的影响(图5c)。根据SETD8之前机制文献研究及SETD8作为epigenetic regulators，作者重点研究SEDT8对p53甲基化的调控。

Cancer cell之所以顶级，其严谨性非常非常高。

                              图6

机制研究深入：证明SETD8及UNC0379对P53信号通路的依赖性。(图6)


                                图7

体内实验：证明抑制SETD8和SETD8抑制剂UNC0379可以削弱肿瘤的生长和延长神经母细胞瘤小鼠的生存率。(图7)

                             该文献的模式图
 
总结为以下图例：

本文有很多亮点，Dr.S感觉第一步从大量基因中通过HCS技术筛选到SETD8基因并通过这个基因找到针对该基因的化合药物是整个研究能成型最关键的一步。

但是一步也是最难的一步哦！  

不用怕，吉凯基因拥有9万个基因的shRNA文库，可从中挑选想要筛选的基因，制备特异干扰慢病毒，同时感染细胞，在短时间内获得数十到数百个基因的功能筛选结果......

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