乙型流感病毒检测试剂盒(实时荧光RT-PCR法)说明书-软件手册-资讯-生物在线

乙型流感病毒检测试剂盒(实时荧光RT-PCR法)说明书

作者:上海雅吉生物科技有限公司 2021-03-26T00:00 (访问量:2085)


【产品名称】

通用名称:乙型流感病毒检测试剂盒(实时荧光RT-PCR法)

英文名称Influenza B virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包装规格】25T/& 50T/

【预期用途】

本试剂盒利用实时荧光PCR原理,定性检测乙型流感病毒,对乙型流感病毒引起的感冒症状及其并发症的诊断及疗效评估有重要指导意义。

【检验原理】

本试剂盒针乙型流感病毒基因组高度保守区域设计特异性引物和探针,在反应体系中含乙型流感基因组模板的情况下,PCR反应得以进行并释放荧光信号。利用仪器对PCR过程中相应通道的信号强度进行实时监测和输出,实现检测结果的定性分析。

【主要组成成份】

序号

组成

25T/

50T/

1

乙流 RT-PCR反应液

437.5μL×1

875 μL×1

2

乙流 混合

62.5 μL×1

125 μL×1

3

乙流 阳性对照

40 μL×1

40 μL×1

4

乙流 阴性对照

40 μL×1

40 μL×1

5

说明书

1

1

注:阴性对照为人基因组DNA,阳性对照为失去活性的乙型流感病毒cDNA

【储存条件及有效期】避光-20以下保存,避免反复冻融,有效期12个月。

【适用仪器】Funglyn Biotech FTC-3000系列,Molarray MA-6000系列、MA-1620Q系列、ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480Cepheid SmartCyclerRotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。

【样本要求】

采用鼻拭子、咽拭子等方法获得样本。具体操作方法如下:

1)鼻拭子: 操作者将沾湿的无菌拭子平行于上腭的角度轻轻地左右转动从一侧鼻孔插入至鼻道内鼻腭处,一般当拭子插入有阻力时再将拭子停留23s后缓慢转动退出

2)咽拭子:操作者一手持压舌板压住病人舌后根,另一手拿住无菌拭子根部,然后将沾湿的无菌拭子左右两面及拭子头部快速且较用力地分别刮取扁桃腺两侧及咽后壁的分泌物。

3)将鼻拭子和咽拭子一起放人盛有1.0ml生理盐水的离心管中备用。

应避免标本间交叉污染。

标本收集后可立即检测;若不能立即检测,可置于28冷藏过夜保存;如需长期保存,标本应冻存于-80以下,避免反复冻融。

【检验方法】

1. 试剂准备(试剂准备区)

1)从冰箱中取出试剂盒, 从试剂盒中取出实验所需试剂,充分融化混匀并瞬时离心以去除管壁附着液体。

2)核算当次实验所需要的反应数(n),并根据如下表所示反应体系计算当次实验所需要的各种试剂量。

n =阴性对照数(1T+阳性对照数(1T+误差预留量(1T+样本数

单反液配制表(每份)

RT-PCR反应液

17.5μL

混合酶液

 2.5 μL

3)在无菌离心管中加入上述试剂,充分混匀后瞬时离心。按照20 μL/管分装量将试剂分装至PCR反应管。

2.样本准备(样本处理区)

RNA提取试剂盒提取RNA,具体操作按照其试剂盒说明书操作。

3.加样

在上述制备好的PCR反应样本管中分别加入处理好的待测标本RNA5 μl、终体积25 μl/管,盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心,转移到PCR仪器上。阴性对照和阳性对照管则各加5 μL试剂盒自带的阴性对照或阳性对照品,终体积为25μl/管,盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心,转移到PCR仪器上.

4. PCRPCR扩增区)

1)取样本处理区准备好的PCR反应管,放置在实时荧光定量PCR仪样品槽相应位置,并记录放置顺序。

2)按下表设置仪器核酸扩增相关参数进行PCR扩增。

反应体积

25 μL

通道选择

FAM通道采集 乙流 荧光信号

 PCR

反应

条件

步骤

条件

循环数

反转录

5010分钟(min

1

预变性

953分钟(min

1

PCR扩增

955秒(s

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