产品名称 : 过氧化物酶测试盒 | QuantiChrom™ Peroxidase Assay Kit
 
分类名称 : 氧化应激测定 
 
产品介绍 : 测定方法  比色法（570nm）或荧光法（530nm/590nm）定量测定过氧化物酶活性。
 
产品说明
过氧化物酶 (酶分类号 1.11.1.x)催化如下氧化还原反应：
    ROOR + 电子供体(2 e-) + 2H+ → ROH + ROH
许多过氧化物酶的最佳底物为过氧化氢(H2O2)，而其他的则是机体内的过氧化物，如脂类过氧化物。 在细胞中，过氧化物酶能破坏有氧呼吸过程中形成的副产物毒性羟基。它作为一大族酶存在于动物、植物、真菌、细菌中。简单、直接、自动化的过氧化物酶测试方法受到了广泛的应用。本公司的过氧化物酶测试方法是利用过氧化氢与电子供体反应形成粉红色产物，其吸光强度(570nm)或荧光强度 (lexc = 530nm, lem = 590nm)可直接用于测定酶活性。 
产品特点
用10 mL样本，检测范围：吸光法4 - 1000 U/L，荧光法0.8 - 25 U/L。
试剂盒组成(96孔板供100份测试)
缓冲液 (pH 7.0)： 20 mL
显色剂：    60 mL
稳定H2O2： 100 mL 3%                       
终止试剂：12 mL
校准液：5 mL (相当于1000 U/L)
  
储藏条件：室温运输，缓冲液和显色剂在-20°C下保存，其余试剂在4°C下保存，保质期3个月。
预防措施：本产品仅供研究用。使用过程中应严格遵循实验安全措施。
样品制备：样品可以照方法[1-3]制备。为确保反应处于检测范围内，宜将样品稀释多次后测试。
试剂制备：测试前将所有试剂放置至室温。将缓冲液中3%的H2O2稀释至 0.6% 并在一小时之内使用。
总则：该项测试基于反应动力学, 建议用多通道加样器添加工作试剂和终止试剂。
96孔板比色法测试步骤 
1. 取透明平底的96孔板，分别将200mL水和200mL校准液放入两孔中。
    再分别取10mL水(空白对照)和10mL样品放入不同两孔。另外，每个检测孔按95 mL缓冲液、0.5 mL显色剂、0.5 mL新稀释的0.6% H2O2混合制备工作试剂。在每个孔板中分别加入90mL工作试剂，轻敲孔板使其混合。 室温下培养10分钟。
2. 在空白对照和样品孔板中分别加入100 mL终止试剂。轻敲孔板使其混合并读取OD570nm值。
注：若样本的OD值高于校准液OD值，需稀释样本并重复检测，结果需乘稀释系数。过氧化物酶活性计算如下：
单位定义：在测试条件下，一单位的酶每分钟可以催化1 mmole过氧化氢的降解反应。
96孔板荧光法测试步骤
 利用黑色平底板进行测试。若需要，可将过氧化物酶标准品(未提供)一同对比测试。
1.取10mL水和10mL样品放置于两孔，每个检测孔按95 mL 缓冲液、0.5 mL显色剂、0.5 mL 新稀释的0.6% H2O2 混合制备工作试剂。在每个孔板中分别加入90 mL工作试剂，轻敲孔板使其混合。室温下培养10分钟。
2. 在空白对照和样品孔板中分别加入100 mL终止试剂。轻敲孔板使其混合并读取在590nm处的荧光值(lexc= 530nm)。
384孔板荧光法测试步骤
用5 mL 水、5 mL样品、 35 mL 工作试剂(由38 mL 缓冲液, 0.2 mL 显色剂, 0.2 mL 0.6% H2O2 配制)、40 mL终止试剂，按照上述方法进行测试。
实验必需品(未提供)
比色法测试：吸液用仪器、离心管、透明平底96孔板、384孔板；荧光法测试：黑色平底96孔板、384孔板及相应吸光率阅读仪。